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貨號：L6090L
產品描述：
大腸桿菌 DNA連接酶催化DNA末端的相鄰5'磷酸和3'羥基之間形成磷酸二酯鍵，需要NAD +和Mg 2+作為輔因子。相對于粘性DNA末端連接和缺口密封，平末端DNA的連接是非常低效的。
規格： | 2,500 U |
濃度： | 10,000 U/ml |
保存： | -25°C至-15°C |
純度（SDS-PAGE） | > 99％ |
活性： | 20,000 - 28,880 U/mg |
SS核酸外切酶 | 100 U < 2.0% released |
DS核酸外切酶 | 100 U < 1.0% released |
DS內切核酸酶 | 100 U = no conversion |
大腸桿菌 DNA污染 | 50 U <10 copies |
蛋白質來源
大腸桿菌表達質粒編碼大腸桿菌DNA連接酶的基因。
提供：
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25℃
隨附：
B6090 (10X E.coli DNA Ligase Reaction Buffer)
10X E.coli DNA Ligase Reaction Buffer (B6090):
300 mM Tris-HCl
40 mM MgCl2
260 uM NAD
10 mM DTT
0.5 mg/mL BSA
單位定義
1單位定義為在25℃下30分鐘內連接100ng DNA的片段的50％與粘性末端所需的大腸桿菌 DNA連接酶的量。
質量控制分析
單位表征測定
單位活性使用2倍系列稀釋法測量。在1X反應緩沖液中制備酶的稀釋液并加入到20μL含有雙鏈DNA的片段和1X反應緩沖液的反應中。將反應在25℃（室溫）孵育30分鐘，在冰上浸入，并在用溴化乙錠染色的1％瓊脂糖凝膠上分析。
蛋白質濃度（OD 280）測量使用使用2.0mg / ml BSA樣品（Pierce Cat＃23209）標準化的Nanodrop ND-2000分光光度計
在OD 280處分析2.0μL酶樣品，并用產品儲存溶液沖切。使用34,280的消光系數和73,606道爾頓的分子量將觀察到的3個重復樣品的平均測量結果轉換為mg / mL。
SDS-Page（物理純度評估）
將2.0μL酶溶液加載到變性的4-20％Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上，該凝膠側翼為寬范圍的MW標記和2.0μL的1:100稀釋的樣品。電泳后，將凝膠染色并比較樣品以確定物理純度。該測試的驗收標準要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質條帶的質量，確認濃縮樣品的純度大于99％。
污染測試
單鏈核酸外切酶活性
將含有10,000cpm放射性標記的單鏈DNA底物和10μl酶溶液的50μL反應物在37℃下溫育4小時，導致TCA可溶性計數的釋放小于2.0％。
雙鏈核酸外切酶活性將含有5,000cpm放射性標記的雙鏈DNA底物10μl的50μL反應液和在37℃下孵育4小時的酶溶液導致少于1.0％的TCA可溶性計數釋放。
雙鏈核酸內切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和100單位酶溶液的50μL反應液在37℃下溫育4小時，結果通過瓊脂糖凝膠電泳測定，沒有視覺上可辨別的轉化為帶切口的環狀DNA。
大腸桿菌 16S rDNA污染測試
將酶溶液的重復樣品變性，并使用對應于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物，在TaqMan qPCR測定中篩選污染性大腸桿菌基因組DNA的存在。測試的驗收標準是由3個重復的無模板對照樣品的平均值產生的閾值循環計數（C t）。基于無模板對照 Ct值與標準曲線數據之間的相關性，該測定的檢測限為<10拷貝基因組/樣品。
部分產品信息：
貨號 | 品名 | 規格 | 濃度 | 品牌 |
|---|---|---|---|---|
N2070-10-L | ATP Solution | 50 µmol | 10 mM | Enzymatics |
N2050-10-L | 10 mM dNTP Solution Mix | 100 µmol | 10 mM | Enzymatics |
N2010L | 100 mM 75µmol dNTP Solution Set | 75 µmol | 100 mM | Enzymatics |
N2010-A-L | 100 mM dATP Solution | 75 µmol | 100 mM | Enzymatics |
N2050L | 100µmol dNTP Solution Mix | 100 µmol | 25 mM | Enzymatics |
Y9180L | 10x Uracil Cleavage System | 750 Reactions | N/A | Enzymatics |
P7670 | 2x HiFi PCR Master Mix | 1 rxn | 2x | Enzymatics |
Y9420L | 5x ER/A-Tailing Enzyme Mix | 24 reactions | N/A | Enzymatics |
Y9380L | E. coli Pyrophosphatase | 50 U | 100 U/mL | Enzymatics |
Y9030L | E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein | 1.5 mg | 2.75 mg/ml | Enzymatics |
Y9140-HC-L | End-Repair Mix (High Concentration) | 75 Reactions | 1 Rxn/µL | Enzymatics |
Y9140-LC-L | End-Repair Mix (Low Concentration) | 200 Reactions | 1 Rxn/µL | Enzymatics |
Y9080L | Endonuclease VIII | 10,000 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
P7600L | EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) | 10,000 U | 200,000 U/mL | Enzymatics |
X8010L | Exonuclease I | 30,000 U | 20,000 U/ml | Enzymatics |
X8020L | Exonuclease III | 50,000 U | 100,000 U/ml | Enzymatics |
P7010-HC-L | Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) | 10,000 U | 50,000 U/ml | Enzymatics |
P7010-LC-L | Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) | 10,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7060L | Klenow Fragment | 2,500 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
X8030L | Lambda Exonuclease | 10,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7040L | M-MuLV Reverse Transcriptase | 100,000 U | 200,000 U/ml | Enzymatics |
P7090L | Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) | 3,000 U | 30,000 U/ml | Enzymatics |
P7140-HC-L | Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) | 100,000 U | 400,000 U/ml | Enzymatics |
P7140-LC-L | Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) | 100,000 U | 40,000 U/ml | Enzymatics |
P7610L | NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions | 250 Reactions | 2X | Enzymatics |
P7590L | Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase | 500 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7460L | Poly(A) Polymerase | 1,000 U | 5,000 U/mL | Enzymatics |
Y9260L | RecA | 1.5 mg | 2.0 mg/mL | Enzymatics |
Y9220L | RNAse H | 5,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
Y9240L | RNAse Inhibitor | 20,000 U | 40,000 U/ml | Enzymatics |
L6010L | T3 DNA Ligase | 900,000 U | 3,000,000 U/ml | Enzymatics |
L6030-LC-L | T4 DNA Ligase | 150,000 U | 120,000 U/ml | Enzymatics |
L6030-HC-L | T4 DNA Ligase (Rapid) | 240,000 U | 600,000 U/ml | Enzymatics |
P7080L | T4 DNA Polymerase | 2,000 U | 3,000 U/ml | Enzymatics |
Y9130L | T4 Gene 32 Protein | 1.0 mg | 10 mg/mL | Enzymatics |
Y9040L | T4 Polynucleotide Kinase | 10,000 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
L6050L | T4 RNA Ligase 1 | 10,000 U | 20,000 U/ml | Enzymatics |
L6080L | T4 RNA Ligase 2 | 4,500 U | 30,000 U/ml | Enzymatics |
L6070L | T4 RNA Ligase 2 Truncated | 500 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
L6020L | T7 DNA Ligase | 900,000 U | 3,000,000 U/ml | Enzymatics |
P7260L | T7 DNA Polymerase | 3,500 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
P7180L | T7 RNA Polymerase | 50,000 U | 50,000 U/ml | Enzymatics |
L6060L | Taq DNA Ligase | 20,000 U | 40,000 U/ml | Enzymatics |
P7110L | Taq DSC 2.0 DNA Polymerase | 1,250 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7250L | Taq-B DNA Polymerase | 10,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7620L | TaqIT | 5,000 U | 50,000 U/mL | Enzymatics |
P7070L | Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) | 6,000 U | 20,000 U/ml | Enzymatics |
G5020L | Thermolabile UDG | 500 U | 1,000 U/ml | Enzymatics |
Y9370L | Thermostable Pyrophosphatase | 1,250 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
G5010L | Uracil DNA Glycosylase | 10,000 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
P7511L | VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase | 500 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
P7520L | VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase | 500 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
L6030-W-L | WGS Ligase | 24 Reactions | N/A | Enzymatics |
P7640L | ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit | 1000 Reactions | N/A | Enzymatics |
P7020-HC-L | φ29 DNA Polymerase (High Concentration) | 2,000 U | 100,000 U/ml | Enzymatics |
P7020-LC-L | φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) | 2,000 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
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