婷婷丁香色丨白丝美女被狂躁免费视频网站丨亚洲另类在线制服丝袜国产丨亚洲黄色片免费看丨国产综合久久久久久鬼色丨久久影视传媒丨色多多成视频人在线观看丨特级西西444ww大胆高清图片丨亚洲国产欧美自拍丨欧美性猛少妇xxxxx免费丨亚洲区一区二丨免费无码午夜福利片丨日本丰满少妇裸体自慰丨国产欧美一区二区三区视频在线观看丨日韩美女毛片丨av精选丨成人性生交大片免费7丨夜夜骑夜夜操丨亚洲国产va精品久久久不卡综合丨唐人社导航福利精品

您好!歡迎訪問上海起發實驗試劑有限公司網站!
全國服務咨詢熱線:

15921799099

當前位置:首頁 > 技術文章 > Favorgen FABGK100說明書

Favorgen FABGK100說明書

更新時間:2018-10-10      點擊次數:2965

Favorgen FABGK100說明書

Favorgen位于中國臺灣國家生物技術園區。它通過自動化系統建立了ISO合格工廠,
生產高質量的分子生物學產品和臨床化學試劑。目前,Favorgen在美國,中國,韓國和丹麥設立分支機構,并在30多個國家設立了分銷網絡。自成立以來,Favorgen已經在其先進的生產設施上投入了大量資金,以競爭力的價格為客戶提供高質量的產品。Favorgen致力于通過與學術和行業合作伙伴的內部和合作開展研究,以不斷提供高質量的創新產品。

 

Favorgen FABGK100說明書

Nucleic-acids extraction Genomic DNA Extraction

核酸提取基因組DNA提取

Genomic DNA Extraction Blood DNA Mini / Midi / Maxi Kit

FavorPrep Genomic DNA Mini Kit (Blood/Cultured Cell)

Cat. No.:

FABGK 100 (100 Preps)

FABGK 300 (300 Preps)

RBC Lysis Buffer 135 ml 405 ml

FATG Buffer 30 ml 75 ml

FABG Buffer 40 ml 100 ml

W1 Buffer 45 ml 130 ml

 

Wash Buffer*

Elution Buffer

(concentrated)

25 ml

30 ml

50 ml

75 ml

FABG Column

 

100 pcs

300 pcs

2 ml Collection Tube 200 pcs 600 pcs

 

 
 

 

 

 

 

次打開時,加入100 ml/200 ml乙醇(96%~100%)到洗滌緩沖液中。

規格

 

樣本量:全血高達300μl

 

凍血可達200μl,布瓦毛可達200μl

 

培養的動物細胞多可達1×10 7

 

培養的細菌細胞多可達1x109,真菌細胞可達5x107。

 

平均產量:約50μg格式:自旋柱

 

處理時間:60分鐘內

 

重要事項

 

本系統中提供的緩沖區包含刺激物。在處理這些緩沖器時,戴上手套和實驗室外套。

 

為了貓。沒有。FABGK 100,次打開時加入100 ml乙醇(96~100%)洗滌緩沖液。為了貓。沒有。FABGK 300,加入200毫升乙醇(96~100%),次打開時加入洗滌緩沖液。

 

在試管中加入200μ1的FATG緩沖液,再用旋渦或圓孔法重新懸浮細胞球團。

 

在室溫下孵育5分鐘,然后從第2步(細胞溶解)開始遵循培養的細胞協議。

 

發現并修理故障,解決紛爭:

 

低產量

 

使用了太多的細胞

 

-減少樣本量。

 

蛋白酶K活性不足導致細胞溶解不良

 

-使用新鮮或保存良好的蛋白酶K庫存溶液。

 

由于與FABG緩沖液混合不足,細胞溶解能力差

 

-用脈沖渦旋法將樣品和光纖光柵緩沖液立即*混合。

 

細胞溶解能力差,原因是培養時間不足

 

-延長孵化時間,確保沒有殘留的微粒。

 

在轉入fbg midi柱之前,未將乙醇加入裂解液中。

 

當次打開時,乙醇不會加入到洗滌緩沖液中;在加入洗滌緩沖液之前,乙醇的體積或百分比是不正確的。

 

基因組DNA的洗脫是無效的

 

-確保ddH2O的pH值在7.5-8.5之間。

 

-加入萃取緩沖液或ddH2O后,在離心前將FABG MIDI柱放置5~10 min。

 

 

血樣中含有血疙瘩

 

-將血樣與抗凝血劑混合,防止血栓形成。

 

樣品太粘稠

 

-減少樣本量。

 

純化的dna在下游應用中表現不佳。

 

樣品是舊的

 

-總要使用新鮮或保存完好的樣本提取基因組DNA。

 

乙醇殘留污染

 

--在洗滌步驟之后,在4000xg下離心10分鐘以干燥FabgMIDI柱。

 

RNA污染

 

 

特別協議:(針對細菌)步驟1-樣品準備

 

革蘭陰性菌:

 

將適當數量的細菌細胞(多可達1×10 9)轉移到1.5ml微離心管(未提供)并全速離心

 

(14,000 rpm或10,000 x g)1分鐘。然后丟棄上清液。

 

加入2 0 0μ1的FATG緩沖液,再用旋渦或管狀再懸浮球團。室溫下孵育5分鐘。

 

從第二步開始遵循培養的細胞協議(細胞溶解)。

 

革蘭陽性細菌:

 

將適當數量的細菌細胞(多可達1×10 9)轉移到1.5ml微離心管(未提供)并全速離心

 

(14,000 rpm或10,000 x g)1分鐘。然后丟棄上清液。

 

加入200μ1的溶菌酶緩沖液(20 mg/ml溶菌酶;20 mm Tris-HCl;2 mm EDTA;1%TritonX-100,pH 8.0;制備新鮮溶菌酶緩沖液)。

 

在使用前),再用旋渦或管道將球團重新懸浮。

 

室溫下孵育10分鐘。在孵化過程中,每2-3分鐘倒置一次.

 

從第二步開始遵循培養的細胞協議(細胞溶解)。

 

特別議定書:(用于真菌)

 

步驟1-樣品準備

 

收集適當數量的真菌細胞(多5×10 7)至1.5ml微離心管(未提供),離心機為5 000 x g

 

10分鐘。然后丟棄上清液。

 

加入6 0 0μ1的山梨醇緩沖液(1.2 M山梨醇;10 mm CaCl 2;

 

0.1mTris-HCl,pH7.5;35 mm-巰基乙醇),并重新懸浮顆粒。

 

添加200 U的裂解酶或酶解酶。在30℃時孵育30分鐘。

 

將混合物在2,000 x克離心10分鐘,取出球體,然后移除上清液。

 

 

一般性議定書:

在開始以下步驟之前,請閱讀重要說明。

 

第1步-紅細胞溶解

 

在抗凝治療收集管中收集新鮮人血。

 

將300μl新鮮血液轉移到1.5ml微離心管(未提供)。如果樣品超過300μl(可達1毫升),將樣品加入無菌15毫升離心管。

 

加入3倍紅細胞溶解緩沖液樣品體積,倒置混合。不要漩渦。

 

室溫下孵育10分鐘。

 

3,000 x g離心5分鐘,*取出上清液。

 

用1 0 0μ1的紅細胞裂解緩沖液復蘇球團。

 

步驟2-細胞溶解

 

加入200μl的光纖光柵緩沖器,并通過渦流混合。

 

在室溫下孵育10分鐘,或直到樣品溶解液清澈為止。在孵化過程中,每隔3分鐘倒置一次管子。

 

預熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟5)。

 

(可選步驟):如果需要無RNA的基因組DNA,在樣品中加入5μl 10 mg/mlRNase A,然后用渦流混合。在室溫下孵育5分鐘。

 

步驟3-綁定

 

在樣品中加入200μl乙醇(96%~100%),攪拌10秒。(如果有任何沉淀物,就會噴出。)

 

將FABG柱放置到2ml收集管上。將樣品混合物(包括任何沉淀物)仔細轉移到FABG柱。離心機

 

全速5分鐘(14,000轉或10,000克)并丟棄2毫升收集管。將FABG列放置在一個新的2ml收集管中。

 

(適用于新鮮血液)

 

特別議定書:(用于培養細胞)

 

步驟1-樣品準備

 

培養動物細胞:

 

在收獲前使貼壁細胞變小。

 

將適當數量的細胞(至多1×10 7)轉移到1.5ml微離心管(未提供),并以6 000 x g離心20秒。

 

取上清,用150μ1紅細胞溶解緩沖液重新懸浮。然后按照步驟2(細胞溶解)。

 

新鮮血液(人血除外):

 

哺乳動物血液的樣本體積(無核)可以是

 

有核紅細胞(如鳥類或魚類)的樣品體積可達10μl。

 

將150μ1的FATG緩沖液和血樣放入1.5ml微離心管(未提供)。按旋渦混合,然后按照步驟2(細胞溶解)進行。

 

步驟2-細胞溶解

 

加入200μl的光纖光柵緩沖器到樣品和漩渦5秒。

 

在70℃下孵育10分鐘,或直到樣品溶解液清澈為止。在孵化過程中,每隔3分鐘倒置一次管子。

 

預熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟5)。

 

(可選步驟):如果需要無RNA的基因組dna,添加5μl

 

RNase A濃度為10 mg/ml,用旋渦混合。在室溫下孵育5分鐘。

 

從步驟3(綁定)開始遵循“一般協議”。

 

步驟4-綁定

 

在樣品中加入250μl乙醇(96%~100%),攪拌10秒。(如果有任何沉淀物,就會噴出。)

 

將FABG柱放置到2ml收集管上。將樣品混合物(包括任何沉淀物)轉移到FABG柱。離心機5分鐘

 

全速(每分鐘14,000轉或10,000克)并丟棄2毫升的收集管。將FABG列放置在一個新的2ml收集管中。

 

步驟5-清洗

 

用400μl W1緩沖液清洗光纖光柵柱。離心機1分鐘

 

全速(14,000轉或10,000 x克)并丟棄流過.

 

將FABG柱放回2ml收集管中。用600μl洗滌緩沖液(添加乙醇)清洗光纖光柵柱。全速離心1分鐘(每分鐘14,000轉或10,000克),并丟棄流動節流閥。 Ghana 加納.

 

-確保乙醇在次打開時加入到洗滌緩沖液中。

 

將FABG柱放回2ml收集管中。離心機

 

全速增加3分鐘(14,000轉或10,000克)干燥柱。

 

-重要的一步!這一步將避免殘留的液體來抑制后續的酶促反應。

 

步驟6-釋放

 

將干燥的FABG柱放置在新的1.5ml微離心管上。

 

將預熱排液緩沖液或TE的100μ1加入到FABG柱膜中心。

 

-重要的一步!若要進行有效洗脫,請確保洗脫液為

 

分散在膜中心,*吸收。

 

將FAGB欄在37 C處孵育10分鐘。

 

全速離心1分鐘(14,000轉或10,000克),以躲避DNA。

 

-標準洗脫體積為100μl。如果需要更高的dna產量,重復dna。

 

洗脫步驟可提高DNA的回收率,總體積可達2 0 0μ1。

 

步驟終-純dna

 

將DNA片段存儲在4℃或-20℃

 

第4步-清洗

 

用400μl W1緩沖液清洗光纖光柵柱。離心30秒

 

全速(14,000轉或10,000 x克)并丟棄流過.

 

將FABG柱放回2ml收集管中。用600μl洗滌緩沖液(添加乙醇)清洗光纖光柵柱。全速離心30秒(每分鐘14,000轉或10,000克),然后丟棄- 通過,穿過.

 

-確保乙醇在次打開時加入到洗滌緩沖液中。

 

將FABG柱放回2ml收集管中。離心機

 

全速增加3分鐘(14,000轉或10,000克)干燥柱。

 

-重要的一步!這一步將避免殘留的液體來抑制后續的酶促反應。

 

第5步-逃避

 

將干燥的FABG柱放置在新的1.5ml微離心管上。

 

特別議定書:(適用于冰凍血液)

 

步驟1-樣品準備

 

將多達200μl的血液轉移到1.5ml微離心管(未提供)。如果樣本容量小于200μl,則添加適當的pbs卷。

 

在樣品中加入30μl蛋白酶K(10 mg/ml),并進行簡單混合。然后在60℃孵育15分鐘。

 

步驟2-細胞溶解

 

加入200μl光纖光柵緩沖器到樣品中,用渦流混合。

 

在70℃水浴中孵育15分鐘,將樣品溶解。在孵化過程中,每3分鐘倒置一次樣品。

 

預熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟5)。

 

(可選步驟):如果需要無RNA的基因組DNA,在樣品中加入5μl 10 mg/mlRNase A,然后用渦流混合。在室溫下孵育5分鐘。

 

從步驟3(綁定)開始遵循“一般協議”。

 

特別議定書:(為Buffy Coat)

 

步驟1-樣品準備

 

將全血在3,300 xg下離心10分鐘,在室溫下可得到三個不同的組分:上清層為血漿;

 

中間層是布菲膜,含有濃縮的白細胞;底層是濃縮的紅細胞。從布菲皮毛中提取總dna將產生比dna高出5-10倍的DNA。 一個等價

 

全血的體積。

 

第2步-紅細胞溶解

 

將多達200μl的布菲大衣轉移到1.5ml的微離心管中(未提供)。

 

加入3倍紅細胞溶解緩沖液樣品體積,倒置混合。

 

室溫下孵育10分鐘。在孵化過程中,每隔3分鐘倒置一次管子。

 

全速離心1分鐘(14,000轉或10,000克),*除去上清液。

 

用5 0 0μ1的紅細胞裂解緩沖液對球團進行復蘇。然后以全速離心1分鐘(14,000轉或10,000克),*除去上清液。

 

用紅細胞裂解緩沖液2 0 0μl復蘇球團。(僅用旋渦將管子混合。確保球團*重新掛起,否則在處理綁定步驟時將阻止列)。

 

步驟3-細胞溶解

 

在樣品中加入250μ1的光纖光柵緩沖液,通過渦流混合。

 

在室溫下孵育30分鐘,或直到樣品溶解液清澈為止。在孵化過程中,每隔3分鐘倒置一次管子。

 

預熱需要70℃水浴中的排出緩沖液(步驟6)。

 

(可選步驟):如果需要無RNA的基因組DNA,在樣品中加入5μl 10 mg/mlRNase A,然后用渦流混合。在室溫下孵育5分鐘。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

基因組DNA提取血液DNA Mini / Midi / Maxi試劑盒

FABGK 000

FavorPrep™血液/培養細胞基因組DNA提取迷你試劑盒

4個準備。

蛋白酶K粉末
FATL緩沖液
FABG緩沖液
W1緩沖液
洗滌緩沖液(濃)
洗脫緩沖液
FABG迷你柱
2ml收集管
1.5ml洗脫管

在室溫(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

FABGK 001

50個準備。

FABGK 001-1

100個準備。

FABGK 001-2

300個準備。

FABGK 100

FavorPrep™血液/培養細胞基因組DNA提取迷你試劑盒

100個準備。

RBC裂解緩沖液 FATL緩沖液 FABG緩沖液 W1緩沖液 洗滌緩沖液(濃) 洗脫緩沖液FABG迷你柱 2ml收集管 




 

在室溫(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

FABGK 300

300個準備。

 

 

FABGK 002-S

FavorPrep血液/培養細胞基因組DNA提取Midi試劑盒

2個準備。

蛋白酶K粉末
FABG緩沖液
洗滌緩沖液W1(濃)
洗滌緩沖液W2(濃)
洗脫緩沖液
FABG Midi柱
15 ml洗脫管

在室溫(15~25℃)下保存2年。

除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

FABGK 002

20個準備。

FABGK000-MAXI

FavorPrep™血液/培養細胞基因組DNA提取Maxi試劑盒

2個準備。

Proteinase K Powder 
FABG Buffer 
W1 Buffer 
Wash Buffer(濃)
洗脫緩沖液
FABG Maxi Columns 
50 ml Elution tubes

在室溫(15~25℃)下保存2年。
除蛋白酶K粉外,貯存于4℃。

 

 

 

 

 

 

 

 

上海起發是實驗試劑一站式采購服務商

1:強大的進口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。

2:產品種類齊全,經營超過700多品牌,基本涵蓋所有生物實驗試劑耗材。

3:提供加急服務,貨品一般1-2周到貨。

4:富有競爭力的價格優勢,絕大部分價格有優勢。

5:多年積累良好的信譽,大部分客戶提供貨到付款服務。客戶包括清華、北大、交大、復旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、國藥、fisher等知藥企。

6:上海起發還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權代理。

7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發,歡迎合作。

 

上海起發實驗試劑有限公司
地址:上海浦東川沙鎮川沙路6619號上海起發實驗試劑有限公司
郵箱:xs1@78bio.com
傳真:021-50724961
關注我們
歡迎您關注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關注我們的微信公眾號
了解更多信息
欧亚乱熟女一区二区在线 | 人人人爽| 超碰人人在线观看 | 狠狠躁日日躁夜夜躁2022麻豆 | 黑人精品欧美一区二区蜜桃 | 国产精品亚洲一区二区 | 日本成人综合 | 国产成人97精品免费看片 | 久久久久亚洲av片无码下载蜜桃 | 久久噜噜色综合一区二区 | 色综合视频在线观看 | 国产免费二区 | 日韩成人福利 | 亚洲精品无码一区二区 | 亚洲第一色网站 | 一区二区三区不卡在线观看 | 山村淫强伦寡妇 | 中文字幕亚洲乱码熟女1区2区 | 18禁一区二区三区 | 国产精品欧美亚洲 | 777免费视频 | 亚洲成av人片在线观看 | 国产亚洲视频在线 | 在线视频一区二区 | 丰满人妻综合一区二区三区 | 激情国产| 亚洲色偷偷色噜噜狠狠99网 | 免费在线一区二区 | 丰满人妻被黑人猛烈进入 | 久久久久久穴 | 国产九九久久 | 不卡福利视频 | 久久久久久久精 | 中出中文字幕 | 香港av在线 | 无码人妻av一区二区三区波多野 | 青青草原免费观看 | 日韩xxx高潮hd| 国产黄色小视频在线观看 | 色狠狠干 | 韩国一区二区三区四区 | 成人1区| 亚洲一区二区三区四区在线观看 | 黄页网站免费观看 | 亚洲第一黄 | 成人午夜网 | 久久精品高清 | a级片网址 | 自拍偷拍第5页 | 精品一区二区免费视频 | 欧美大肥婆大肥bbbbb | 韩国精品在线观看 | 性视频播放免费视频 | 日本老师巨大bbw丰满 | 美女被娇喘流出白 | 亚洲国产精品自拍 | 黄色一级视频免费看 | 国产又黄又猛又粗又爽 | 户外少妇对白啪啪野战 | 中文字幕在线免费看线人 | 日韩欧美在线视频观看 | 二区三区| 噼里啪啦动漫 | 久久久久国产精品 | 秘密基地免费观看完整版中文 | 成人91在线观看 | 日本三级吹潮 | 波多野吉衣一区二区 | 婷婷色一区二区三区 | 久草视频免费 | 后进极品美女圆润翘臀 | 日韩欧美亚洲国产 | 亚洲自拍偷拍一区 | 亚洲欧美日韩精品久久亚洲区 | 在线亚洲成人 | 四虎成人精品在永久免费 | 婷婷丁香色 | 中文字幕高清在线 | 欧美a视频| 草莓视频网| 老熟妇一区二区三区啪啪 | 嫩草视频在线 | 日韩在线视频一区二区三区 | 激情图片在线观看 | 成熟女人毛片www免费版在线 | 国产精品久久777777换脸 | 毛片在线观看网站 | 久草资源在线 | 超碰997| 色丁香婷婷 | 亚洲一区二区免费在线观看 | 日韩欧美国产视频 | 日韩有码一区二区三区 | 男人添女人下部高潮全视频 | 色播丁香 | 亚洲精品一区二区三区新线路 | 亚洲一区二区三区精品视频 | 国产日韩欧美在线播放 | 国产日韩亚洲 | 天天做天天摸天天爽天天爱 | 国产伦理一区二区 | 打屁股网址 | 暖暖视频日本 | 国产高清日韩 | 在线播放91灌醉迷j高跟美女 | 国产美女自拍 | 91在线视频免费播放 | 欧美专区在线播放 | 国产精品色网 | 亚洲 欧美 日韩在线 | 欧美性猛交乱大交 | 日本黄在线观看 | 伊人狼人综合 | 一区二区三区伦理 | 噜噜噜久久,亚洲精品国产品 | 熊猫电影yy8y全部免费观看 | 久久久五月 | 丁香花电影在线观看免费高清 | 国产v片 | 亚洲AV无码久久精品国产一区 | 黄色免费网站 | 欧美日韩免费一区二区三区 | 国产一卡二卡三卡四卡 | 六月婷婷中文字幕 | 最好看的mv中文字幕国语电影 | 欧美h网站 | 成人3d动漫一区二区三区91 | 毛片日本 | www.久久99 | 日日摸天天添天天添破 | 亚洲色图日韩 | 欧美人妖xxxx | 丰满少妇中文字幕 | 老司机免费精品视频 | 在线综合视频 | 日本在线中文 | 中文字幕乱码免费 | 毛片女人| 好吊妞精品 | 深夜福利视频在线观看 | 美女扒开尿口给男人捅 | 超碰在线网址 | 福利视频网站导航 | 极品美女av | 成人福利网址 | 亚洲福利| 舞蹈生被调教成肉奴1~17 | 欧美精品免费在线观看 | av电影网站在线观看 | 日韩av在线免费 | 95久久| 日韩在线中文 | 99免费精品 | 娇妻被肉到高潮流白浆 | 黄色网页免费 | 日本少妇一区二区三区 | 天堂成人在线视频 | 亚洲经典自拍 | 亚洲麻豆av| 色窝窝无码一区二区三区 | 日韩综合在线视频 | 男生和女生一起差差差视频 | 日日夜夜艹 | 国产v在线 | 国产精品3区 | 久久xxxx | 伊人激情综合 | 亚洲成人av一区二区三区 | 谁有av网址 | a在线视频播放观看免费观看 | 日韩一区二区视频在线观看 | 激情综合五月婷婷 | 亚洲国产高清在线 | 99在线免费视频 | 香港av在线 | 亚洲影音 | 亚洲爽妇网 | 又色又爽又黄无遮挡的免费视频 | 91亚洲国产成人精品一区二区三 | 草莓视频成人app免费 | 免费看污片网站 | 性福利视频| 成人午夜淫片100集 国产大片b站 | 四虎影院在线视频 | 艳妇乳肉豪妇荡乳av | 茄子视频在线看 | 午夜福利毛片 | 国产伦精品一区二区三区四区视频 | 日本丰满少妇做爰爽爽 | 国产精品第108页 | 国产黑丝在线 | 超碰超碰超碰超碰超碰 | 国产6区| 久久人人干| 亚洲乱码一区二区三区 | 色戒电影未测减除版 | 久久国产免费 | 欧美综合激情 | 欧美视频一区二区三区 | 字幕网av | av影片在线| 日本人与黑人做爰视频 | 干爹你真棒插曲免费 | 成人黄色网址在线观看 | 香蕉色网 | 狠狠干香蕉| 日本动漫艳母 | 亚洲国产精品成人无久久精品 | 亚洲激情视频在线 | 人人澡超碰碰97碰碰碰 | 日韩区在线 | 日韩porn | 久久久久国产精品夜夜夜夜夜 | 视频一区中文字幕 | 青青草激情视频 | 自拍偷拍小视频 | 尤物精品视频 | 色网视频| 超碰超碰超碰超碰 | 性生活视频播放 | 这里只有精彩视频 | 激情午夜视频 | 老熟妇高潮一区二区高清视频 | 成人hd | 人人干人人艹 | 美女啪啪免费视频 | 日韩青青草 | 高清一区二区三区视频 | 日韩精品偷拍 | 成人在线超碰 | 中国肉体裸体bbbbb | 福利一区二区视频 | 99久久99久久免费精品蜜臀 | 肥臀熟女一区二区三区 | 亚洲欧美日韩一区 | 日皮视频免费观看 | 精品一区二区三区视频 | h网站在线播放 | 一区二区三区四区在线 | 欧美亚洲一区二区三区 | 中文字幕av一区二区三区 | 欧美福利社 | 少妇流白浆 | 欧美aⅴ| 伊人伊人伊人 | 国产极品在线播放 | 韩国精品久久久 | 未满十八岁禁止进入 | 日日干,夜夜操 | 在线视频天堂 | 手机免费看av | 天堂综合 | 日本a一级| 西西人体午夜视频 | 欧美久久久久久久久久久久 | 亚洲免费观看高清在线观看 | 一级欧美日韩 | 国产精品视频免费在线观看 | 中文字幕av久久爽一区 | 久久综合激情 | 91精品婷婷国产综合久久 | 狂野欧美性猛交xxⅹ李丽珍 | 免费观看成人毛片 | 亚洲麻豆视频 | 男生和女生一起搞鸡 | 亚洲一区精品在线 | 亚洲国产精品综合久久久 | 日韩三级视频在线播放 | 星空大象在线观看免费播放 | av性天堂网 | 91丨国产丨捆绑调教 | 精品亚洲aⅴ无码一区二区三区 | 国产91精品一区二区 | 国产精品s色 | 青青草精品| 天堂久久久久久 | 亚洲国产第一页 | 欧美午夜精品 | 国产午夜大地久久 | 久久精品国产av一区二区三区 | 亚洲av无一区二区三区久久 | 国产精品xxx在线观看 | 伊人影院在线视频 | 在线观看国产黄 | 精品日韩在线观看 | 日本一区二区视频在线观看 | 男女交性视频 | 亚洲男人天堂影院 | av久久| sm调教视频在线观看 | 免费a在线观看播放 | 男女吻胸做爰摸下身 | 日韩中文在线视频 | 影音先锋男人的天堂 | 亚洲色图欧洲色图 | 日本成片 | 青青草福利 | 欧美黑人粗大 | 国产18禁黄网站免费观看 | 天堂中文字幕在线 | 黄色茄子视频 | 亚洲一区二区网站 | 久久午夜夜伦鲁鲁片无码免费 | 伊人春色av| 久草日韩| 美女啪啪免费视频 | 成人欧美在线观看 | 夜夜操狠狠操 | 丁香网五月天 | 成年人一级片 | 免费成人在线网站 | 青青草原国产在线 | 久久久久久欧美精品se一二三四 | 中文字幕日本电影 | 一区视频在线播放 | 国产亚韩 | 日日拍拍 | 精品爱爱 | 人人艹人人 | 亚洲国产综合一区 | 免费黄色网址在线观看 | 欧美性网 | 粉嫩一区二区三区 | 秘密基地在线观看完整版免费 | 天码人妻一区二区三区在线看 | 丰满人妻一区二区三区四区53 | 永久免费视频 | 国产福利电影 | 在线看免费| 欧美精品在欧美一区二区少妇 | 一卡二卡三卡在线观看 | 免费看一级大片 | 91色中文 | 97在线免费 | 日本japanese调教vk| 午夜18视频在线观看 | 久久国产一区二区三区 | 欧美性生活网站 | 精品三级在线观看 | 自拍在线视频 |